ناقشت اطروحة دكتوراه في فرع الاحياء المجهريه بكلية الطب دراسة تصنيع اللقاح المؤتلف في الإشريشية القولونية للسلالة المحلية من كوفيد -19
للطالبة صبا فلاح كليف بأشراف أ.د.عدنان حمد الحمداني وأ.د. منال محمد كاظم .
تناولت الاطروحة دراسة السلالات الموجودة في العراق من خلال الدراسة الجزيئية للنتوء الشوكي لفيروس المتلازمة التنفسية الشديدة -2
-تصنيع الجين المشفر للبروتين receptor binding domain لفيروس الكورونا
وانتاج هذا البروتين في البكتريا الايريشية القولونية المعدلة وراثيا بعملية transformation and expression of recombinant Protein
ثم عمل تنقية وتجريع البروتين مع adjuvant للحيوانات المختبرية ودراسة titer of IgG وعد الخلايا الدم البيض .
هدفت الاطروحة الى:
1. دراسة الخارطة الجينية باستخدام البادئات الخمسة التي تهدف النتوء البروتيني لفيروس الكوفيد-19 في الديوانية وتسجيل السلالات المحلية في جين البنك الامريكي .
2. تسجيل اهم الطفرات في السلالات المحلية خلال فترة الدراسة .
3. انتاج البروتين receptor binding domain في البكتريا المعدلة وراثيا BL21-DE3 وتنقيتة.
4. استخدام البروتين المؤتلف ودراسة فعاليته داخل الخلايا الحية من خلال استعمال الحيوانات المختبرية ودراسة معيارية الاجسام المضاده المتولده وعد الخلايا البيضاء
5. قياس فعالية البروتين خارج الجسم من خلال مقايسة إنزيم المواد الماصة المناعية
استنتجت الاطروحة :
1.دراسة التباين في جين السنبلة خلال فترة الدراسة ودراسة السلالات المختلفة الموجودة في العراق.
2. تم تسجيل السلالات ووهان ، ألفا ، كابا ، دلتا ، أوميكرون في العراق.
3. تم تسجيل اهم الطفرات الرئيسية في جميع السلالات مع أكثر من 25 طفرة ، حذف ، إدخال واستبدال.
4. انتاج البروتين في البكتريا الإشريكية القولونية هو الأنسب لأغراض فحص المستضد ، حيث يوفر طريقة غير مكلفة ، والأهم من ذلك ، سريعة للتعبير عن أجزاء بروتين متعددة وعزلها وتحليلها
5. مجال ارتباط مستقبلات البروتين S هو الهدف الرئيسي للقاح يحفز المناعة الوقائية
6. استنساخ وتحويل RBD في البكتيريا يعتبر تقنية حديثة في العديد من تقنيات الهندسة الجزيئية المطبقة على الفيروسز
7. RBD قابل للذوبان المعبر عنه في E. coli BL21 (DE3) ؛ من اختبار ELISA يوضح أن البروتين المؤتلف وظيفي ومرتبط بـ ACE2 لمرضى المشافين من الكورونا
8. يمكن استخدام RBD المنتج من الإشريشية القولونية لتطوير اللقاح لمنع مستقبلات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين من أجل تحييد عدوى .SARS-Cov2-
التوصيات:
1. من المهم الاستمرار في عزل المتغير وتحديده بشكل دوري لتسجيل السلالة الجديدة التي أصابت المرضى بفيروس SARS-CoV2.
2. دراسة الجينوم الكامل لـ sars-cov2 يعطي مزيدًا من المعلومات حول المتغير والطفرة الرئيسية للجزء الآخر من السنبلة.
3. توصية لمحاولة استخدام الجزء S1 من الجين الشائك كلقاح وحدة فرعية مع دراسة الاستضاد والاستمناع للبروتين.
4. محاولة بناء بروتين سبايك RBD ومحاولة التعبير عنه في خلية حقيقيات النوى مثل [HEK-293] أو خلايا الحشرات بمستوى دراسة للتعبير والتنقية مع النمط الظاهري والتأثير على حيوية الخلية.
5. توفير جميع المعدات والاحتياطات لعزل فيروس SARS-CoV2 وإعداد اللقاح الفيروس المقتول .
